Extracción  de ADN 

Extracción

La extracción del ADN requiere una serie de etapas: en primer lugar tiene que romperse la pared celular ( en el caso de células animales) o la membrana plasmática (puesto que trabajemos con células animales), para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse la membrana nuclear para dejar libre el ADN contenido en el núcleo. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo, y para aislarlo hay que hacer que este precipite en alcohol.

Materiales:

- Una cebolla fresca

- Detergente 

-Sal

-Agua destilada 

- Zumo de piña 

-Alcohol de 96º muy frío 

-Vaso de cristal alto

- Una batidora

Procedimiento:

Una vez cortada la zona central de la cebolla en cuadrados:

1. En un vaso de agua añadir 3 cucharaditas de detergente de lavavajillas, una  cucharada de sal y agua destilada.
2. Mezclar la anterior solución con los trozos de cebolla.
3. Licuar el conjunto con la batidora a velocidad máxima durante unos 30 segundos.
4. Filtrar el líquido obtenido con un filtro de café.
5. Llenar hasta aproximadamente la mitad un vaso de cristal alto con la disolución ya filtrada.
6. Añadir 3 cucharadas de café, zumo de piña o de papaya y mezclar bien.
7. Añadir un volumen de alcohol muy frío equivalente al filtrado, cuidadosamente, haciéndolo resbalar por las paredes del vaso para que forme una capa sobre el filtrado. Se puede utilizar una varilla a modo de ayuda.
8. Dejar reposar durante 2 o 3 minutos hasta que se forme una zona turbia entre las dos capas. A continuación, introducir la varilla y extraer una maraña de fibras blancas de ADN.

Cuestiones:

1º. ¿Qué función crees que desempeñan el lavavajillas y la sal en la solución?

La solución de lavavajillas y sal, con la ayuda de la licuadora, es capaz de romper la pared celular y las membranas plasmática y nuclear, para poder extraer el ADN.

2º. ¿ Para qué utilizamos el zumo de piña?

Los zumos de piña y papaya contienen un enzima, la papaí- na, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contaminar o degradar el ADN. 

3º. ¿ Para qué utilizamos el alcohol?

El alcohol se utiliza para concentrar el ADN, ya que éste es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol, se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. 

Observación del ADN

Objetivos:

El objetivo fundamental de esta práctica es utilizar unas sencillas técnicas, para poder extraer y observar el ADN de un tejido animal y otro vegetal, y por el aspecto que se presenta, confirmar su estructura fibrilar. A partir de la longitud de las fibras, también se confirma que en el núcleo el ADN se encuentra replegado.

Materiales:

-Muestra de ADN ya obtenida.

-Portas 

-Cubres 

-Varilla de vidrio 

-Cuentagotas

-Colorantes 

-Microscopio

-Agua destilada 

Procedimiento:

1. Con una varilla de vidrio o un cuentagotas, extraer los filamentos observador en la probeta y depositarlos sobre el portaobjetos.

2. Añadir unas gotas de orceína acética o de hematoxilina, y dejar que tiñan durante diez minutos.

3. Lavar la preparación con agua destilada, cuidando de no arrastrar las fibras de ADN, secar los bordes, colocar el cubre y observar al microscopio.

4. Las fibras de ADN presentan una coloración clara mientras que el resto del material es de color oscuro.

5. Observar los resultados en el microscopio.

Cuestiones:

1º. Dibujar y colorear lo observado en la preparación indicando los aumentos utilizados.

(172x172)

 2º. Definir nucleótido, escribiendo la fórmula de uno cualquiera que justifique tal definición. 

Un nucleótido es un compuesto orgánico que está formado por una base nitrogenada (adenina, timina, guanina o citosina) , un azúcar y ácido fosfórico, cuya combinación con otros nucleótidos, produce ADN o ANR. De acuerdo con esta definición una posible fórmula de un nucleótido sería la siguiente:

3º. ¿Qué nucleótidos forman el ADN y cuales el ARN?

Es posible dividir los nucleótidos en ribonucleótidos (cuando el azúcar es la ribosa), formando ARN,  y desoxirribonucleótidos (si el azúcar es la desoxirribosa), que forman el ADN. Un ribonucleótido es un nucleótido formado por la unión de una purina o una pirimidina y una molécula de ribosa, mientras que los desoxirribonucleótidos poseen la misma estructura que los nucleótidos: Una base nitrogenada, un grupo fosfato y una pentosa, en este caso la desoxirribosa. Diferenciando ribonucleótidos y desoxirribonucleótidos por el azúcar que contienen, ribosa o desoxirribosa, respectivamente.

4º. ¿Qué molécula resulta más estable químicamente, la de ADN o la de ARN? ¿A qué se debe esta estabilidad?

El ARN y ADN son muy similares estructural y bioquímicamente. La diferencia es que el ARN está formado por una única hebra, mientras que, el ADN es una doble hélice (una espiral). De manera adicional, el ARN es relativamente inestable en comparación con el ADN, dado que se degrada más rápidamente. Así que, aunque el ARN puede haber funcionado como la primera molécula de almacenamiento de información, hubo una presión evolutiva que condujo al desarrollo de una molécula de almacenaje más estable, como la del ADN. En conclusión la molécula de ADN es más estable químicamente, dado que presenta una doble hélice que forma una espiral, por tanto su degradación conlleva mayor esfuerzo que la degradación de la molécula de ARN.

Resultados obtenidos

Estudio de la actividad enzimática de la catalasa.

Introducción

La catalasa es una enzima presente en los peroxisomas de las células de todos los tejidos animales y vegetales. Actúa sobre el peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) descomponiéndolo en agua y oxígeno, y liberando energía en forma de calor. El agua oxigenada es un producto resultante de las reacciones metabólicas y si no se destruye puede ser tóxica para la célula. Si se pone un tejido en contacto con el agua oxigenada se observa la aparición de efervescencia (producción de oxígeno). 

En esta práctica vamos a destacar la presencia de catalasa en los diferentes tejidos y estudiar dos factores que influyen en la actividad de la misma: pH y temperatura. 

 Material

• 12 tubos de ensayo y 1 placa Petri. 
• Gradilla.
• Probeta.
• Lanceta o bisturí.
• Pinzas.
• Mechero.
• Agua oxigenada. 
• Ácido clorhídrico
• NaOH.
• Un trozo de tejido animal (Bonito) y otro de un tejido vegetal (papa).

Metodología

Preparación control.

1. Cortar un trozo semejante de cada tejido.
2. Introducirlos cada uno en un tubo de ensayo.
3. Añadir 3cc de agua oxigenada a los dos tubos.

Influencia de la temperatura de la actividad enzimática.

1. Cortar dos trozos semejantes, uno de cada tejido.
2. En dos tubos de ensayo añadir 5cc de agua de grifo y una muestra de tejido.
3. Cocer al baño María dos trozos de muestra durante ocho minutos y sacar. Volver a poner dentro de un tubo vacío.
4. Añadir 3cc de agua oxigenada a los dos tubos.

Resultados

En las muestras sin tratar se muestra la actividad de la catalasa además de la producción de efervescencia. Mientras que en la muestra cocida, con HCL y NaOH, no presentan catalasa y la proteína se desnaturalizó.